300 Глава IV. Половые гормоны
мальных животных характеризуется определенными изменениями в структуре клеток слизистой оболочки влагалища. В кульминационной точке эструса слизистая приобретает своеобразный ороговевший вид, резко отличаясь от состояния слизистой в период покоя или ее постоянного состояния у кастрированных животных. Микроскопическое исследование влагалищных мазков дает вполне надежные указания на наличие течки у подопытного животного.
Аллен и Дойзи приготовили спиртовые (бесклеточные) экстракты яичников, способные вызвать характерные явления эструса у подопытных животных, и тем самым, доказали химическую природу активного начала. Активность препаратов выражают в мышиных или крысиных единицах. Мышиной единицей гормона называют наименьшее количество его, достаточное для вызывания эструса у кастрированной мыши.
При различных методах исследования, применяемых в разных лабораториях, мышиная единица составляет от 0,04 до 0,1 -у чистого эстрона; за международный стандарт принята активность 0,1 •; чистого эстрона. Биологический метод определения эстрогенной активности дает надежные и воспроизводимые результаты. Поскольку половой цикл мыши длится всего 4-6 дней, испытание может быть проведено достаточно быстро. Отношение мышиной единицы (м. е.) к крысиной единице (к. е.) обычно колеблется, в зависимости от применяемых растворителей и метода инъекции, от 1 :5 до 1:7.
Метод Аллена -Дойзи оказался незаменимой путеводной нитью при поисках чистых эстрогенных гормонов. Активное вещество было обнаружено в фолликулярной жидкости, в плаценте млекопитающих и в крови; из первых двух источников несколько исследователей получили весьма активные экстракты. Однако органические растворители извлекают наряду с гормоном значительное количество других веществ, и отделение гормонов от инертного материала тканей оказалось чрезвычайно трудной задачей. Выделение чистого гормона удалось осуществить лишь после того, как Ашгейм и Цондек6 в 1927 г. установили, что эстрогенные вещества выделяются в значительном количестве с мочей беременных женщин. Указанное наблюдение имело огромное значение и позволило ускорить химические исследования, так как оказалось, что простая экстракция мочи беременных женщин бензолом или эфиром дает растворы гормона, отличающиеся большей активностью и меньшим содержанием затрудняющих очистку примесей, чем препараты, приготовленные из экстрактов тканей путем трудоемкой очистки. Наличие удобного источника для получения гормона и надежного метода испытания его физиологической активности позволило быстро завершить химические исследования, и в 1929 г. гормон был выделен в двух лабораториях в чистом кристаллическом состоянии. Эти работы будут описаны ниже.
Исследования в области мужских половых гормонов 7 были начаты еще в 1849 г. опытами Бертольда. Кастрация петуха приводит к характерным изменениям его вторичных половых признаков: гребешок и бородка атрофируются и почти полностью исчезают. Бертольд установил, что при пересадке каплуну ткани семенников рост гребешка возобновляется. Опыты по регенерации вторичных половых признаков у каплуна при пересадке тестикулярной ткани были повторены значительно позже (Пезар, 1911 г.), однако гормональная природа этого явления была установлена лишь в 1927 г., когда Макги 8 приготовил бесклеточный спиртовый экстракт семенников быка, содержащий активное начало, способное вызывать рост гребня у каплунов. Это наблюдение было вскоре подтверждено и дополнено другими исследователями (Кох и Мур, Леве
|